【方法】ATCC细胞用海藻酸钠和氯化钙固定绿色木霉，将游离绿色木霉和固定化绿色木霉分别培养一段时间，离心培养液，用分光光度计法检测上清液中纤维素酶活性。在上清液中加入浓缩的小球藻悬浮液，用显微镜计数细胞壁破碎的小球藻。【结果】绿色木霉能同时分泌内切葡聚糖酶、外切葡聚糖酶及β-1,4葡萄糖苷酶3种纤维素酶，其中外切葡聚糖酶活性zui高。固定化绿色木霉反复使用5次后，分泌的纤维素酶活性能保持到初次的67.4%。市售纤维素酶、游离绿色木霉、固定化绿色木霉初次及第5次分解小球藻细胞壁...

日本学者山中伸弥将oct4、Sox2、Klf4、c-myc四个基因插入到成体干细胞DNA中重编程细胞恢复到胚胎干细胞状态，由此建立了iPS细胞。这些细胞可以向胚胎干细胞一样，转变为几乎所有的组织类型。为此,山中伸弥在2011年获得诺贝尔奖。虽然iPS细胞有潜力发育为任何组织器官，但如何诱导它们往正确的方向分化问题尚未解决。由中科院上海生命科学院/上海交大医学院健康科学研究所金颖教授带队的关于“基于诱导多能干细胞技术的若干重大疾病模型与机理研究”的“973”科技部重大科学研究项...

专家发现，乳牙中含有的干细胞是间充质干细胞，而间充质干细胞在医学界对其价值早有肯定，从2010年~2015年的数年间，医学杂志中刊载有诸如“脱落乳牙干细胞和骨髓干细胞改善了红斑狼疮小鼠模型的骨密度和骨结构，抑制了骨质疏松的发生。”“对比人脱落乳牙干细胞和骨髓干细胞发现，脱落乳牙干细胞具有远优于骨髓干细胞的免疫调节能力”“牙齿干细胞的免疫调节特性使其成为自身免疫疾病和炎症相关疾病细胞治疗的重要干细胞来源，其获取远比骨髓干细胞容易”等多种理论。2011年，翟永标、凌均棨也在《口腔...

干细胞能够无限增殖，也能分化和发育为数百种不同细胞和身体组织的任何种类，这种多能性使得干细胞具有巨大的生物医学工程学潜力。然而直到现在人们都难以确定整个细胞变化状态过程干细胞发育调控的复杂性。利用强大的新型单细胞遗传分析技术，揭示出多能干细胞的变化远比以前所认识的要多得多。使得研究人员朝着某天能够将多种不同类型的干细胞应用于疾病治疗和再生治疗又近了一步。在干细胞群中单个细胞之间具有很大的差异。一直以来它都被视作是开发可预测的干细胞工程学方法中存在的一个问题。现在，我们发现人们...

转化细胞培养液的成分：体外细胞培养所需营养物质与体内基本相同，例如，需要糖、氨基酸、无机盐、促生长因子、微量元素等。将细胞所需的上述物质按其种类和所需数量严格配制而成的培养基，称为合成培养基。由于动物细胞生活的内环境还有一些成分尚未研究清楚，所以需要加入动物血清以提供一个类似生物体内的环境，因此在使用合成培养基时，通常需加入血清、血浆等一些天然成分。1、动物细胞培养液的特点：液体培养基、通常含动物血清。2、动物细胞培养的条件：①无菌、无毒的环境：对培养液和所有培养用具进行无菌...

干细胞低温冻存是培养室常规工作和通用技术。细胞冻存在-196℃液氮中，储存时间几乎是无限的。细胞冻存及复苏的原则是慢冻快融。1．冻存细胞（1）选对数增生期细胞(证明无支原体污染)，在冻存前1d换液。（2）按常规方法把培养细胞制备成悬液，计数，使细胞密度达5×107／ml左右密度，离心，去上清。（3）加入配制好的冻存液（培养液6.8ml，小牛血清2ml，DMSO1ml，5.6%NaHCO30.1ml），按与去上清相同的量一滴一滴加入离心管中，然后用吸管轻轻吹打令细胞重悬。冻存细...

肿瘤细胞冷冻与复苏是细胞培养的常规工作，可以解决细胞因为连续继代造成的退变或转化。细胞的原代培养和传代培养以及细胞冻存和复苏后都需要细胞计数。那么细胞计数与存活的测试实验方法有哪些呢？1、原理：（1）计算细胞数目可用血球计数盘或是Coultercounter粒子计数器自动计数。（2）血球计数盘一般有二个chambers，每个chamber中细刻9个1mm2大正方形，其中4个角落之正方形再细刻16个小格，深度均为0.1mm。当chamber上方盖上盖玻片后，每个大正方形之体积为...

一、转化细胞准备工作准备工作对开展细胞培养异常重要，推备工作中某一环节的疏忽可导致实验失败或无法进行。准备工作的内容包括器皿的清洗、干燥与消毒，培养基与其他试剂的配制、分装及灭菌，无菌室或超净台的清洁与消毒，培养箱及其他仪器的检查与调试等。1、清洁、消毒、液体直接接触细胞的用品要超净处理——无非必须分子直接接触细胞的用品要*消除微生物超净和消毒过的样品要密闭保存，标记消毒时间实验室保持洁净，随时消毒尽量采用商品化一次性用品操作者也要清洁和消毒缓冲液要符合生理渗透压（280～3...

一旦培养的肿瘤细胞生长成形态上单一的细胞群体或细胞系（或株）后，不论用于实验研究还是建立细胞系，都需要做一系列的细胞生物学测定，主要的目的在于求得证明：所培养的细胞系的确来源于原体内具有恶性的细胞，而非正常细胞或其它细胞。均具有瘤种特异性。阐明一般生物学性状。测定项目数量无明确规定，根据需要而定，以下为常做的项目和要点。【形态观察】主要观察细胞的一般形态，如大体形态、核浆比例、染色质和核仁大小、多少等以及细胞骨架微丝微管的排列状态等。【细胞生长增殖】检测细胞生长曲线、细胞分裂...

成骨和成脂诱导是鉴定干细胞的一种重要的方法，也是zui常用、报道见得zui多的方法。成骨zui常用的染色方法是茜素红染色（碱性磷酸酶），成脂诱导zui常用是OilRedO（油红O）染色法。下面介绍一下这两种染色方法的原理和步骤。成骨诱导分化茜素红染色方法和原理：茜素红又名茜素磺酸钠，茜素S，茜素红S，茜素胭脂红，1,2-二羟基蒽醌-3-磺酸钠，1,2-二羟基蒽醌-3-磺酸钠盐。橙黄色或黄棕色粉末。易溶于水，微溶于乙醇，不溶于苯。1%水溶液pH为2.15，其水溶液呈浅黄褐色，加...

转化细胞深层培养可分为：分批式、流加式、半连续式、连续式、连续式和灌注式五种。一、分批式培养（batchculture）是细胞规模培养发展进程中较早期采用的方式，也是其它操作方式的基础。该方式采用机械搅拌式生物反应器，将细胞扩大培养后，一次性转入生物反应器内进行培养，在培养过程中其体积不变，不添加其它成分，待细胞增长和产物形成积累到适当的时间，一次性收获细胞、产物、培养基的操作方式。该方式的特点:操作简单。培养周期短，染菌和细胞突变的风险小。反应器系统属于封闭式，培养过程中与...

肿瘤细胞培养成功关键在于：取材、成纤维细胞的排除、选用适宜的培养液和培养底物等几个方面。在具体培养方法方面，肿瘤细胞培养与正常组织细胞培养并无原则差别，初代培养应用组织块和消化培养法均可。1、取材：人肿瘤细胞来自外科手术或活检瘤组织。取材部位非常重要，体积较大的肿瘤组织中有退变或坏死区，取材时尽量避免用退变组织，要挑选活力较好的部位。癌性转移淋巴结或胸腹水是好的培养材料。取材后宜尽快进行培养，如因故不能立即培养，可贮存于4℃中，但不宜栽过24小时。2、培养基：肿瘤细胞对培养基...